İçerik
- Asıl fark
- Güney lekelenmesi vs. Batı leke
- Karşılaştırma Tablosu
- Güney leke nedir?
- Batı leke nedir?
- Anahtar Farklılıklar
- Sonuç
Asıl fark
Southern Blotting ve Western Blotting arasındaki ana fark, Southern Blotting'ın belirli bir örnekte belirli bir DNA fragmanını tespit etmek için kullanılan bir teknik iken Western Blotting'in belirli bir örnekte belirli bir proteini bulmak için kullanılmasıdır.
Güney lekelenmesi vs. Batı leke
Leke, bilim adamları tarafından farklı molekül türlerini bir karışımdan veya numuneden ayırmak için kullanılan bir tekniktir. Bu teknikte, nükleik asitler (DNA ve RNA) ve bir karışımdaki proteinler gibi makromoleküller bir jel tabakasından geçer. Burada, dakika parçacıkları büyüklerinden daha hızlı hareket eder. Bu moleküller, molekülleri membran üzerine aktaran hareketsiz bir zarın yüzeyine karşı bastırılır. Spesifik materyalin tespiti bazında farklı lekeleme türleri vardır, yani güney lekeleme, kuzey lekeleme ve batı lekelenme. Southern lekeleme, DNA'yı saptamada kullanılan lekeleme türüdür, western lekeleme ise proteini bulmak için kullanılır. Southern blot, 1975 yılında Edward M. Southern tarafından geliştirilmiştir. Dolayısıyla, Southern blotting olarak bilinir. Öte yandan, batı lekelenmesi 1979'da Stanford Üniversitesi'ndeki George Stark'in grubu tarafından geliştirilmiştir. Bu isim güney lekelenme ile eşleşmek için kullanılmıştır. Southern lekeleme, spesifik bir DNA dizisini bulmak için kullanılırken, western lekeleme, spesifik bir amino asit veya protein dizisini bulmak için kullanılır.
Karşılaştırma Tablosu
| Güney lekelenmesi | Batı leke |
| Belirli bir karışımda belirli bir DNA dizisini bulmak için kullanılan bir teknik güney lekeleme olarak bilinir. | Belirli bir karışımdaki proteinin spesifik bir amino asit dizisini bulmak için kullanılan bir teknik güney lekeleme olarak bilinir. |
| Tarafından geliştirilmiş | |
| Southern blot, 1975 yılında Edward M. Southern tarafından geliştirilmiştir. | Western blot, 1979'da Stanford Üniversitesi'ndeki George Stark'in grubu tarafından geliştirilmiştir. |
| Algılama türü | |
| Southern lekeleme, spesifik bir DNA dizisini bulmak için kullanılır. | Western blotlama, spesifik bir amino asit veya protein sekansı bulmak için kullanılır. |
| Prensip | |
| Hibridizasyon prensibi ile çalışır. | İmmünodeteksiyon metodu veya antijen-antikor etkileşimi prensibi ile çalışır. |
| İncelemek, bulmak | |
| Prob olarak tek iplikli bir DNA veya bazen RNA kullanılır. | Birincil ve ikincil antikorlar bir prob olarak kullanılır. |
| Jel elektroforezi | |
| Agaroz jel elektroforezi, Southern blotta kullanılır. | Western blotta proteinleri ayırmak için kullanılan SDS PAGE / Poliakrilamid jeli |
| Kurutma Prosedürü | |
| Southern lekeleme, kılcal nakil prosedürünü takip eder. | Western Blot, elektrik transfer prosedürünü izler. |
| Numune | |
| Southern lekeleme sırasında, numunenin denatüre edilmesi gerekir. | Western blot işlemi sırasında, örnek kendi doğal durumunda olmalıdır. |
| bloke etme | |
| Güney blotta bloke etme gibi bir adım yoktur. | Western lekeleme sırasında, spesifik olmayan antikor bölgeleri nitroselüloz kağıda süt tozu veya sığır serum albümini (BSA) yardımı ile bloke edilir. |
| Etiketleme Yöntemleri | |
| Güney lekelemede kullanılan yaygın etiketleme yöntemleri, kromojenik boyaların kullanılması veya radyo etiketleme veya flüoresan etiketleme vb. | Western lekelenmesinde kullanılan etiketleme yöntemleri, flüoresan etiketli antikor veya radyo-etiketleme, kromojenik boyalar veya diaminobenzidin oluşumu vb. Kullanımıdır. |
| Algılama yöntemleri | |
| Işığın tespiti, Autoradiograph ve renkteki değişiklikler güney lekelenmesinde tespit yöntemleri olarak kullanılır. | Western blotta algılama yöntemleri renkteki değişiklik ve ışığın tespiti vb. |
| Uygulama | |
| Southern blot, DNA tespitinde, babalık testinde, DNA parmaklamasında, mağdurun tanımlanmasında, suçluların tanımlanmasında, bulaşıcı ajanları bulmak ve mutasyon veya gen yeniden düzenlemesini tanımlamak için kullanılır. | Western blot, bir karışımdaki protein sayısını bulmak, serumda HIV, virüs ve bakteri vb. Varlığını tespit etmek, kusurlu proteinleri bulmak ve herpes, hepatit B, Lyme için kesin bir ölçü olarak kullanmak için kullanılır. hastalık ve Creutzfeldt-Jacob hastalığı, vb. |
Güney leke nedir?
Güneyli lekeleme, Güneyli lekelenme olarak adlandırılan Edwin Southern tarafından verilen en eski lekeleme yöntemidir. Belirli bir numune veya karışımdaki spesifik bir DNA dizisini bulmak için kullanılır. Güney lekelenmesi sırasında atılan adımlar elektroforez, transfer ve spesifik dizilerin tespitidir. Her şeyden önce, DNA spesifik kısıtlama enzimi yardımı ile parçalanır. Ardından istenen DNA parçaları jel elektroforezi ile ayrılır. Bu fragmanlar, iki DNA şeridini ayırmak için alkalin bir çözelti, örneğin NaOH vb. Yardımıyla denatüre edilir. Bu tek sarmallı DNA parçaları daha sonra lekeleme işlemi yoluyla bir zara aktarılır. Bu membrana bağlı DNA daha sonra etiketli bir probla işlem görür. Bu prob, otoradiogram vb. İle görselleştirilebilen zar DNA'sındaki tamamlayıcı zincirine bağlanacaktır.
Batı leke nedir?
Western blot metodu, George Stark'in, protein içerisindeki belirli bir amino asit sekansını tanımlamak için kullanılan Stanford Üniversitesi'ndeki grubu tarafından icat edildi. Aynı zamanda protein lekesi veya immün lekeleme olarak da bilinir. Western blot işlemi sırasındaki adımlar, elektroforez, transfer ve spesifik proteinlerin tespitidir. Her şeyden önce karışımı homojenize edin. Daha sonra elektroforez yardımı ile ilgilenilen molekülü ayırın. Bu molekülleri zara aktarın ve spesifik probu kullanarak spesifik proteini tanımlayın.
Anahtar Farklılıklar
- Belirli bir karışımda belirli bir DNA dizisini bulmak için kullanılan bir teknik, güney lekeleme olarak bilinirken, belirli bir karışımdaki proteinin spesifik bir amino asit dizisini bulmak için kullanılan bir teknik, güney lekeleme olarak bilinir.
- Güney lekelenmesi, 1975 yılında Edward M. Güney tarafından, güney lekelenmesi olarak bilinen tarafından geliştirilmiştir. Öte yandan, batı lekelenmesi 1979'da Stanford Üniversitesi'ndeki George Stark'in grubu tarafından geliştirilmiştir.
- Southern lekeleme, spesifik bir DNA dizisini bulmak için kullanılır. Tersine, western blot, spesifik bir amino asit veya protein sekansı bulmak için kullanılır.
- Southern blot, çevirme tarafında hibridizasyon prensibi ile çalışır; western blot, immün modifikasyon metodu veya antijen-antikor etkileşimi prensibi ile çalışır.
- Tek iplikçikli bir DNA veya bazen RNA, diğer tarafın Southern lekelenmesinde bir prob olarak, western lekelenmesinde birincil ve ikincil antikorlar bir prob olarak kullanılır.
- Agaroz jel elektroforezi güney lekelemede, SDS PAGE / Poliakrilamid jeli batı lekelemede proteinleri ayırmak için kullanılır.
- Güney lekeleme, diğer taraftan, kılcal nakil prosedürünü izler; western Blot, elektrik transfer prosedürünü takip ediyor.
- Southern lekeleme sırasında, numunenin denatüre edilmesi gerekir, oysa, western lekeleme sırasında, örnek kendi doğal durumunda olmalıdır.
- Bloke etme gibi herhangi bir adım, çevirme tarafında güney lekelenmesinde yer almaz, batı lekelenmesi sırasında, spesifik olmayan antikor bölgeleri, nitroselüloz kağıda süt tozu veya sığır serum albümini (BSA) yardımı ile bloke edilir.
- Güney lekelemede kullanılan yaygın etiketleme yöntemleri, kromojenik boyaların kullanılması veya radyo-etiketleme veya flüoresan etiketleme vs. kullanımıdır; batı lekelemede kullanılan etiketleme yöntemleri, floresan etiketli antikor veya radyo-etiketleme, kromojenik boyaların kullanılması veya diaminobenzidin oluşumu vb.
- Işığın tespiti, Autoradiograph ve renkteki değişiklikler güney lekelemede tespit yöntemleri olarak kullanılırken, batıdaki lekelemelerde tespit yöntemleri renk ve ışığın tespiti vs.
- Southern blot, DNA tespitinde, babalık testinde, DNA parmaklamasında, mağdur tanımada, suçluları tespit etmede, bulaşıcı ajanları bulmak ve mutasyon veya gen yeniden düzenlemesini belirlemek için kullanılır. Tersine, western blot, bir protein içindeki protein sayısını bulmak için kullanılır. Karışım, serumda HIV, virüs ve bakteri vb. varlığını saptamak, kusurlu proteinleri bulmak ve herpes, hepatit B, Lyme hastalığı ve Creutzfeldt-Jacob hastalığı vb.
Sonuç
Yukarıdaki tartışma, güney lekelemenin, bir örnekte spesifik DNA segmentini bulmak için kullanılan en eski lekeleme tekniği olduğunu, batı lekelenmesinin daha sonra keşfedildiğini ve belirli bir amino asit dizisini veya spesifik bir proteini tanımlamak için kullanıldığını özetlemektedir.
